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UNG酶

Q:作用

A:UNG酶可选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键,对RNA无活性,主要应用于PCR扩增产物的防污染。


Q:酶活性单位定义

A:在20mM Tris-HCL(PH8.0),1mM DTT,1mM EDTA反应液中,37°-50度条件下反应1小时,能够降解1nmol含尿嘧啶的DNA所需的酶量定义为一个活性单位。


Q:活性测试

A:在含dUTP不含dUTP的PCR产物中,加入或不加UNG酶,50°反应2分钟,94°2分钟灭活UNG酶,电泳检测条带。
结果显示,在含dUTP的PCR产物中加UNG酶,50°反应2分钟后,DNA被完全降解;在不含dUTP的PCR产物中加UNG酶,电泳谱带不发生变化。


Q:酶储存缓冲液配置

A:

20mM
Tris-HCL(PH7.5)
50mM
NaCL
1mM
DTT
1mM
EDTA
50%(v/v)
Glycerin


Q:推荐实验

A:本酶可作用于普通PCR反应液和RT-PCR反应液


Q:PCR反应体系配置实例

A:

反应液组分
加量
5xPCR Buffer
5ul
dU plus dNTP Mix
1ul
Primer1(10uM)
0.5ul
Primer2(10uM)
0.5ul
Taq(5U/ul)
0.2ul
UNG(1U/ul)
0.2ul
模板
1ul
蒸馏水
up to 25ul


Q:反应条件

A:50°反应2分钟,94°处理2分钟,随后做PCR扩增


Q:反应温度、时间;失活温度、时间;是不是95°变性?55°是否可以失活?反应多久?

A:50°反应2分钟,94度2分钟失活。55度也可以失活,反应5min

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